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ST2單克隆 包被抗體

目前使用抗體的實(shí)驗(yàn)方法有很多，不同的使用方法過程中，因?yàn)閷Φ鞍讟悠返奶幚矸绞讲灰粯?，蛋白的含量有差異，對抗體的識別表位和效價要求都是不一樣的。具體的根據(jù)說明書注明的產(chǎn)品應(yīng)用方法進(jìn)行選擇。如果針對具體的實(shí)驗(yàn)方法沒有找到合適的抗體的，可以結(jié)合蛋白序列分析和抗體的抗原信息，選擇盡可能有效果的抗體。

 一般基于實(shí)驗(yàn)操作的實(shí)驗(yàn)方法不會使用帶有標(biāo)記的一抗，比如 WB、IHC 等，都是通過二抗類的試劑標(biāo)記達(dá)到結(jié)果呈現(xiàn)的目的。但是基于儀器分析的一些實(shí)驗(yàn)，可能就會使用到直接標(biāo)記的一抗，比如流式實(shí)驗(yàn)。那么需要了解到自己將要使用的儀器能檢測到的熒光范圍，針對不通的參數(shù)要求選擇對應(yīng)的標(biāo)記物。在免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)中，需要選配不同的熒光標(biāo)記物。有人認(rèn)為單抗比多抗好，其實(shí)這并不是一個嚴(yán)謹(jǐn)?shù)挠^點(diǎn)，只能說在可能性上單抗的特異性更好一些，而多抗的親和力會優(yōu)于單抗，并且特異性并不一定就遜于單抗，主要看抗原的設(shè)計(jì)水平。目前商品化抗體里單抗主要是鼠單抗、兔單抗，多抗主要是兔多抗、山羊多抗等，其他種屬來源抗體較少。不建議糾結(jié)于單抗好還是多抗好，能做出實(shí)驗(yàn)的抗體就是好抗體。

在選擇上一般建議實(shí)驗(yàn)種屬和抗體種屬親緣性越遠(yuǎn)越好，不宜同源。抗體不同種屬會要影響接下來二抗的選配。特別是在免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)中，需要在區(qū)別于實(shí)驗(yàn)種屬的基礎(chǔ)上，區(qū)分開兩個指標(biāo)的抗體種屬來源，以便于二抗區(qū)別識別。

抗體選擇與使用過程中，多少還會遇到一些意想不到的事情。有些細(xì)節(jié)，還是需要多注意一些。如在選擇做阻斷或中和實(shí)驗(yàn)時，有時需要將抗體加到細(xì)胞培養(yǎng)液中，這是需要注意抗體是否含有疊氮鈉。如果是大包裝的抗體，進(jìn)行分裝是比較節(jié)約的方式，如果是高效價的，可以配成母液再分裝?？贵w的短時間運(yùn)輸，用普通冰塊保持溫度是可以滿足要求的。

另外不要糾結(jié)于 WB 過程中分子量的問題。很多時候，我們看到同樣的抗體，不同的品牌，甚至同一品牌不同的貨號，標(biāo)注的分子量都不一樣。其實(shí)可能只是生物試劑商只檢測時使用了不同的種屬不同的樣品類型，或是參照了不同的文獻(xiàn)，對使用者來說，同樣的樣品，不管使用哪個品牌的，只要抗體是對的，目的條帶只會出現(xiàn)在相同的位置。關(guān)于分子量的問題，一般不建議看產(chǎn)品說明，WB 中條帶的位置由樣品決定，并不會因?yàn)榭贵w不同而不同。所以在檢測蛋白之前，我們可以通過數(shù)據(jù)庫或參考文獻(xiàn)，對將要檢測的蛋白做個比較全面的了解，包括其可能剪切與修飾的情況、表型的情況等。在第一次使用一個新的抗體時，不要根據(jù)分子量橫向剪膜，可以保留幾個全泳道，看看條帶位置或分布的情況。

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