原位雜交（FISH、FISH、IF三染）

服務(wù)介紹：

原位雜交與免疫熒光原理：原位雜交是指將特定標記的已知序列核酸為探針與細胞或組織切片中核酸進行雜交，從而對特定核酸順序進行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細胞標本或組織標本上進行。免疫熒光就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體或抗原上，與其相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合后，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。

通過原位雜交雙探針及免疫熒光進行三標，可以在組織細胞中對核酸分子和蛋白指標同時進行共定位、以及定性分析，可以用來從共定位角度提示核酸和蛋白存在相互作用。

實驗流程：

石蠟切片熒光探針原位雜交雙探針與免疫熒光三染實驗步驟

1. 組織固定、脫水、切片、石蠟切片脫蠟至水;

2. 消化：切片于修復(fù)液中煮沸10-15分鐘，滴加蛋白酶K消化;

3. 預(yù)雜交：滴加預(yù)雜交液，37°C孵育1h。

4. 雜交：傾去預(yù)雜交液，滴加含探針probe1+probe2 雜交液, 濃度 ，恒溫箱 度雜交過夜。

5. 雜交后洗滌：SSC洗滌;

6. 孵育一抗、二抗：滴加一抗，4℃過夜，后PBS洗3×5min;滴加相應(yīng)二抗，室溫孵育50min，PBS洗3×5min;

7. DAPI復(fù)染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min;

8. 鏡檢拍照;

送樣要求：

1、切片前處理要求：新鮮組織干冰運輸后做冰凍切片；或取2mm左右厚度的新鮮組織，5min內(nèi)投入原位雜交固定液內(nèi)固定，4℃低溫保存運輸，切勿冷凍結(jié)冰，盡快包埋切片后進行原位雜交實驗，固定時間過長影響核酸檢出率；

2、冰凍切片：冰凍切片-20℃運輸；

3、石蠟切片：石蠟切片常溫運輸；

4、細胞爬片：細胞爬片加原位雜交固定液固定15min后，換無酶PBS，密封，4℃運輸。 

單據(jù)填寫：

1、探針合成：需提供待測目的基因序列或基因登錄號、所需標記類型；

2、自帶探針需告知完整探針信息；

3、寫明檢測要求。