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α-凝血酶(凍干粉)使用原理

更新時間:2024-04-16      瀏覽次數(shù):339

α-凝血酶(凍干粉)使用原理

α-凝血酶(α-Thrombin)是一種高度特異性的絲氨酸蛋白酶,由凝血酶原(Prothrombin,II因子)經(jīng)蛋白水解活化而來。它在凝血過程中起著非常重要的作用,不僅能夠促使纖維蛋白凝塊的產(chǎn)生,還負責提供反饋信號來激活前輔因子:V因子和VIII因子。也可以激活XIII因子和血小板,或者用作血管收縮劑。


在體內(nèi),活化的X因子(Factor Xa)切割凝血酶原,釋放出活性肽并將凝血酶切割成具有催化活性的α-凝血酶。α-凝血酶由一條輕鏈(A chain)(Mw~6,000)和一條重鏈(B chain)(Mw~31,000)通過二硫鍵連接而成。某些情況下,α-凝血酶會發(fā)生自溶生成β-凝血酶和γ-凝血酶。β-凝血酶由對α-凝血酶A鏈水解并切割含有B鏈糖基化位點的小片段(B1,B2)組合而成。

除了用于凝血研究之外,α-凝血酶還常用來位點特異性切割融合蛋白。基因重組時將凝血酶識別位點插入在目的蛋白與利于后續(xù)純化和/或表達的多肽或者蛋白之間,通過凝血酶切割表達的重組子即可釋放目的蛋白。凝血酶本身可通過親和層析技術快速去除。

本品是由勻質化的人凝血酶原經(jīng)由Xa因子,Va因子和磷脂活化而得,經(jīng)SDS-PAGE檢測確保凝血酶原的完-全活化,并以NIH凝血酶的標準品為參考,提供的酶活力不少于3091 NIH U。
使用方法(酶切體系)

   

產(chǎn)品溶于水,配成的1000 U/ml儲存液,根據(jù)使用量分配于不同的離心管中,凍存于?20℃保存,凝血酶對不同的融合蛋白切割效率是不一樣的,首先要進行小量切割試驗。比如固定融合蛋白10ug,加不同量的凝血酶(如0.1U,?0.2U,?0.5U,?1U等),?在不同的溫度(如4度,?16度,?室溫或37度等)下進行試驗。

 

建議摸好最佳條件后再進行擴大酶切實驗

   

注意事項

   

1) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2) 本產(chǎn)品僅作科研用途!


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